Kerbala University journal of kerbala university 1813-0410 10 0 2014 01 01 Activity Aspergillus oryzae to cellulase production فعاليةAspergillus oryzaeفي انتاج انزيم السليلز 15 27 91253 EN Athraa H. Muhsin Mushin H. Resin Fatima abide AL-Hussein Journal Article 2014 06 01 This study aimed to extractioncellulase enzymes and purificatied by using many methods The crude enzymes when using ammonium sulfate had total activity (14 , 90 , 2835 )U, total protein 10.57 mg and the specific activity ( 0.013 , 1.57, 2.68 ) U/mg protein The crude culture filtrate containing Filter paperase (FPase) , Carboxymetheylcellulase (CMCase) and β-glucosidase were subjected to ammonium sulfate precipitation. Different concentrations (20, 40,60, 80 and 100%) of ammonium sulfate were used for that purpose. After conducting some preliminary trials, 40- 60 % concentrationwere selected for the enzyme precipitation. On the other hand,the protein of crude enzyme extract was separated in (33 ) fractions of fungi from DEAE-cellulose column is ,It was found that only the fractions ( F-8) contained cellulase activity., while other fractions were eluted by the buffer containing different concentrations of Nacl .On the other hand,the component of the active fraction ( F-8) , obtained after DEAE cellulose chromatography was separated by gel filtration and gave only one peak of enzymes alone and the fraction also found to be contained cellulase activity. as given in the specific activity of cellulase were ( 15.67 , 7.94 , 1972 .16 ) U/mg for FPase ,CMCase and β-glucosidase respectably and characterized purified enzyme effect of various pH values the highest enzyme activity was found at 5.5 pH. When the pH of the enzyme medium was increased up to 6.0 , FPase enzyme giving activity ( 0.91 ) U , but CMCase and β-glucosidase giving highest activityat pH 6 were ( 0.34 , 65.12 ) U and the activity declining at pH 5 to ( 0.25 , 59.95 ) IU . and It found that the enzyme exhibited maximum activity at 25 C° in CMCase was ( 0.33 ) U , but 30 C° for β-glucosidase was ( 38.22 ) U . On the other hand, FPase was having activity at 25 and 30 C° were (0.14,0.15)U. Finally,the crude enzyme preparation was subjected to SDS-PAGE to determine the molecular weight of the enzyme.While conducting the electrophoresis, one major band showing cellulolytic activity. The molecular weight of the protein was found to be about (38) kD, (52) kD and (49) kD for (FPase ,CMCase , β-glucosidase ) respectively. تهدف هذه الدراسة إلى استخلاص أنزيمات التحلل السليلوزي وتنقيتها باستخدام عدد من الطرق حيث استعمل الانزيم الخام وتم ترسيبه بواسطة كبريتات الامونيوم حيث اعطى فعالية كلية للأنزيم14 ), 90,2835 ) وحدة دوليةوالبروتين الكلي 10.7ملغم و الفعالية النوعية كانت ( 2.68 , 1.57 , 0.013 ) وحدة دولية , فالزرع الخام والمرشح حاوي على اأنزيماتFilter paperase(FPase)، (CMCase)Carboxymetheylcellulase و β- glucosidasesالمترسبة بواسطة كبريتات الامونيوم بمختلف التراكيز (20، 40، 60، 80 و 100) % و بعد الاستنتاج في المحاولات الاولية وجد ان تركيز ( 40-60) % استعمل لغرض ترسيب الانزيم. اما البروتين ( الانزيم الخام ) فقد تم فصله في (33) جزء حمل على عمودDEAE-cellulose حيث وجد فقط ان الجزء ((F-8 الحاوي على الفعالية الانزيمية , بينما الاجزاء الاخرى حملت على بفر حاوي على تراكيز متدرجة من كلوريد الصوديوم.من جانب اخر المكونات الفعالة للجزء ((F-8 الحاصل عليها من كروتوكرافيا التبادل الايوني فصلت بواسطة الترشيح الهلامي و اعطى قمة واحدة للأنزيم والجزء الحاوي على الفعالية الانزيمية اعطى فعالية نوعية كانت (15.67، 7.94،. 1972 .16 /) وحدة دولية / ملغم للإنزيمات FPase، CMCase و β- glucosidases على التوالي . بعد تنقية الانزيم تم توصيفه حيث وجد ان أعلى نشاط للأنزيم عند pH 5.5ارتفع نشاط الانزيم الى 6 من جانب اخر اظهر الانزيمات فعالية عالية عند pH ( 4.5- 6 ) فأن انزيم FPase اعطى فعالية 0.91 وحدة دولية ولكن CMCase و β- glucosidases اعطى اعلى فعالية انزيمية عند PH 6 كانت ( 0.34 و 65.12)وحدة دولية وانخفضت عند pH 5 وكانت الفعالية (0.25,59.95) وحدة دولية. وجد ان فعالية الانزيم في درجة الحرارة ملائمة لنشاط CMCase في 25م0 وكانت 0.33 وحدة دوليةولكن في 30م0 ارتفعت فيها فعالية انزيمβ-glucosidasesالى38.22 وحدة دولية بينماFPase امتلك فعالية عالية عند 25 و 30 م0 وصلت الى( 0.14 , 0.15 ) وحدة دولية.واخيرا فان الانزيم الخام المنقى تم تحميله SDS-PAGEلتحديد الوزن الجزيئي للأنزيم. عند إجراء الترحيل الكهربائي حيث تم تحديد الوزن الجزيئي و استنتج من الترحيل ظهور ثلاث قطع تشير الى الانزيمات فالوزن الجزيئي كان (38, 52و 49) كيلو دالتون للانزيمات FPase، CMCase و β- glucosidases على التوالي. https://kj.uokerbala.edu.iq/article_91253_c498509acce67d4999938aebed8c0228.pdf